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YJ-VS-1型单人垂直超净工作台

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超净台下的小鼠肾小管上皮细胞培养实例

更新时间:2013.02.01   来源:超净台   浏览次数:

超净台下的小鼠肾细胞培养所用试管洗涤方法
洗衣粉洗---冲净20遍---超生两次(每次2分钟)---自来水冲洗--烘干---泡酸8h----自来水冲洗20遍----纯水冲洗干净---烘干---包装高压

超净台下的细胞培养使用规范
1.打开无菌工作台及净化室的紫外灯,消毒30min以上。
2.进入净化室前先关闭紫外灯,打开超净台风机,等待30min以上,以排尽臭氧。
3.穿好隔离衣,戴好口罩,帽子。
4.风淋2分钟。
5.75%酒精喷手上手套消毒
6.再超净台内的整个过程必须一直点燃着酒精灯;超净台内应避免放入过多的物品;使用的吸管,滴管,试管,培养瓶等均事先灭菌。
7.打开各类瓶盖前先过火,以固定灰尘;打开的瓶口、试管口过火焰,镊子使用前应经火焰烧灼。
8.水平式风机的超净台,应使瓶口斜置,应尽量避免瓶口敞开直立。
9.同一根吸管或滴管不应连续用于几个不同的细胞系;吸取培养基的吸管应离开培养瓶或试管口0.5cm,避免伸入培养瓶口或试管口;以防止细胞系的互相混杂污染。
10.漏在培养瓶上或台上的液体,立即用酒精棉球擦净。
11.操作完毕后恢复工作台面,关闭风机。

2012.12.29
小鼠肾小管上皮细胞培养
基础培养液配置:
完全培养基的配置:基础培养基+胎牛血清+抗生素和链霉素
1. 取两个灭菌平皿,两个都加适量基础培养基
2. 试验小鼠最好禁食12小时,自由饮水。在细胞间外颈椎脱臼致死,75%酒精中浸泡即可带进细胞间,75%酒精浸泡5min左右取出
3. 以下步骤须在超净台操作。用镊子将小鼠拿出后放于干净托盘在超净台上(小鼠均腹部向上以便肾脏取出)
4. 用镊子和剪刀剪开肚皮,用另一镊子和剪刀取出肾脏放入盛有基础培养基的培养皿
5. 用两个弯镊子剖肾筋膜,之后放于80目细胞筛(细胞筛浸有基础培养基的培养皿中),肾脏用培养基浸湿后直接在细胞筛上研磨,直至磨至近白色即可弃去此筛
6. 用150目细胞筛进行过滤(因肾小管段在范围为80—150目内所以150目筛上的是我们所要的),此筛下放一平皿用来接过滤液即为废液(过滤时用移液枪操作)
7. 另取一新培养皿,将150细胞筛反过来放在培养皿上,用移液枪吸取基础培养液将肾小管段冲洗至培养皿中,尽量少用培养液
8. 弃去细胞筛,将有肾小管段的培养液倒入15ml离心管1000r/min离心4min
9. 弃上清,加等量胶原酶(胶原蛋白水解酶(Collagenase) 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大),37度温浴15min
10. 1100r离心5min,弃上清
11. 两只小鼠加36ml完全培养基,用移液器将肾小管段尽可能的吹散
12. 细胞瓶中放5ml培养且细胞瓶盖不要拧紧以便细胞呼吸,六孔板中放2ml培养,24孔板放100微升培养为佳。这是原代细胞培养。
2012.12.30 下午
13.细胞传培养:
从对侧倒掉培养液,用酒精棉球擦拭最后一滴,注意要靠近酒精灯。
如果细胞不干净可用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度,然后让其停止消化。


本文共分 1

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